СТАТТЯ
ШУМЕЙКО В.М., канд. мед. наук, доцент Інститут токсикології і фармакології АМН
Проведені дослідження дають підставу стверджувати, що протефлазід є новим вітчизняним противірусним препаратом, який містить флавоноїдні глікозиди. Його отримують із диких трав: трави луговика дернистого та війника наземного. Препарат здатний пригнічувати ферменти тимідинкіназу зворотну транскриптазу та ДНК-полімеразу в індукованих клітинах, перешкоджаючи тим самим розмноженню вірусу. Окрім того, він є індуктором синтезу ендогенних альфа і гама-інтерферонів, що підвищують природну резистентність та імунний статус організму.
Терапевтична ефективність аерозольної обробки молодняку склала 98,3-99,7%.
Відомо, що гострі респіраторні захворювання (ГРЗ) в Україні завдають відчутних економічних збитків тваринництву. Передусім це вірусні хвороби: парагрип-3, інфекційний ринотрахеїт, вірусна діарея, аденовірусна і респіраторно-синтиціальна інфекції, які ускладнюються хламідіозною, мікоплазмозною, пастерельозною, сальмонельозною та іншими бактеріальними інфекціями.
Як правило, так звані «пневмоентерити» зустрічаються в тих господарствах, де незадовільні умови годівлі, утримання, догляду, як материнського організму в сухостійний період, так і новонароджених в перші 2-3 місяці життя. Різкі переводи молодняку тварин і птиці з одного корму на інший призводить до зниження природної резистентності та імунного статусу їх організму.
Надзвичайно негативними факторами, що призводять до ГРЗ є порушення параметрів мікроклімату, накопичення в приміщеннях для тварин аміаку (понад 20 мг/м3 повітря), контамінація повітря умовно патогенною і патогенною мікрофлорою, перегрів та переохолодження організму тварин і ін.
Недотримання в технології вирощування молодняку: порушення основного принципу «все пусто — все зайнято», несвоєчасне видалення з приміщень гною, гноївки, а також відсутність санації та дезінфекції сприяють накопиченню негативної мікрофлори та прояву захворювань [1-4, 8, 9].
Під впливом патогенних збудників та їх токсинів в респіраторному тракті тварин та птиці, починаючи з носової порожнини, трахеї, бронхів і до альвеол проходить руйнування клітин війчастого епітелію, а трахеобронхіальний секрет втрачає антивірусні і антибактеріальні властивості. В першу чергу це стосується зниження лізоциму, інтерферону, лактоферину і пірогенів. Погіршується функція фагоцитарної системи захисту альвеол легень, активність альвеолярних макрофагів і нейтрофілів. Лімфо-епітеліальні вузлики, повітряносних шляхів, а згодом і регіональні лімфатичні вузли, тимус, червоний кістковий мозок, селезінка в ослабленому організмі також втрачають захисні властивості, що призводить до розвитку трахеїту, бронхіту, катаральної та гнійно-катаральної бронхопневмонії й загибелі тварин. Лише при гострій формі спалаху парагрипу-3 хвороба протягом 7-8 днів охоплює 70 -90% телят, із летальністю понад 20% [1, 3, 4, 8, 9, 11, 13].
Враховуючи асоціативну роль вірусів з представниками різних патогенних мікроорганізмів в етіології ГРЗ, перед нами постали завдання провести пошук нових біологічно-активних протимікробних препаратів і використати аерозольний метод їх застосування у виробничих умовах. На сьогодні можна стверджувати, що такими препаратами можуть бути протефлазід, хвойна хлорофіло-каротинова паста та флавосмолон.
Перші дослідження по вивченню фармакологічних властивостей цих препаратів, механізму їх дії на мікроорганізми, в лабораторних і виробничих дослідах нами проведено разом із науковими співробітниками інституту фармакології та токсикології АМН України д.х.н. Овруцьким В.М. і доцентом Шумейко В.М. (1992-1999 pp.). Встановлено, що отриманий із диких трав: трава луговика дернистого (Deschampsia caespitosa L) і трава війника наземного (Calamagrostis epigeios L) протефлазід є новим лікувальним противірусним препаратом, який містить флавоноїдні глікозиди. Його противірусна дія зумовлена здатністю пригнічувати в інфікованих клітинах ферменти ДНК-полімеразу, тимідинкіназу і зворотну транскриптазу, перешкоджаючи тим самим розмноженню вірусу. Окрім того, він є індуктором синтезу ендогенних альфа- і гама-інтерферонів, що підвищують природну резистентність та імунний статус організму. Його можна розглядати також і як адаптоген, який нормалізує фізіологічний стан організму, і зокрема, процеси збудження і гальмування в ЦНС.
В досліді, проведеному на щурах, визначено, що при оральному застосуванні препарату його ЛД50 складає 50 мг/кг і вказує на приналежність до 4 класу токсичності. В дозі 6,8 мкг/мл не проявляє
мутагенності.
Протефлазід сприяє адаптації організму до несприятливих впливів та суттєво покращує показники крові, детоксикаційну функцію печінки і нирок хворого організму. На сьогодні він досить широко використовується в медицині для лікування і профілактики герпес-вірусних інфекцій, при комплексному лікуванні гепатитів (А, В, С)таВІЛ-СНІДу [6,12, 13].
За повідомленням М.В. Нестерової, С.Д. Загородньої, М.С. Дяченко, В.П. Атаманюка, A.M. Новика, С.Л. Рибалко, Г.В. Баранової (2004) протефлазід проявляє виражену активність по відношенню до віруса Епнштейна-Барр і може бути перспективним для лікування зумовлених ним захворювань у людей [5]. С.Л. Рибалко, С.Т. Дядюн, І.Б. Дубровський, А.В. Білоус, В.П. Атаманюк, Є.Л. Гончаренко, М.В. Абдулаєва (2004) на моделі вірусу гепатиту С довели, ефективність протефлазіду для профілактики та лікування хвороби [7].
Мета і завдання подальших наших досліджень полягали в розробці аерозольного методу профілактики і лікування ГРЗ молодняку сільськогосподарських тварин та птиці шляхом використання протефлазіду, флавосмолону і хвойної хлорофіло-каротиновоїпасти. Важливим моментом в досягненні мети слугувала монографія та праці О.В. Селіванова і Ч.Г. Хасанова (1983) «Групова профілактика інфекційних хвороб тварин».
Необхідність глибокого проникнення в легені аерозольних частинок (0,2-5 мкм) їх здатність затримуватися в респіраторному тракті та дослідження інших властивостей змусило також нас замість САГ-1 та САГ-10 сконструювати новий тип аерозольного розпилювача (АР-10).
Науково-виробничі досліди з вивчення лікувально-профілактичних властивостей аерозолів протефлазіду, флавосмолону і ХХКП проведені нами в неблагополучних по ГРЗ господарствах Київської, Черкаської та Хмельницької областей на 731 теляті, 150 поросятах і 39000 птиці, не рахуючи лабораторних тварин в ізоляторі клініки кафедри епізоотології та інфекційних хвороб НАУ.
Дослідні і контрольні групи тварин формували за принципом аналогів. У тих випадках, коли за епізоотичною ситуацією контрольні групи тварин неможливо було не лікувати використовували один із традиційних ветеринарних препаратів. Це давало можливість порівняти їх ефективність при тій чи іншій інфекційній хворобі (табл.1).
Протефлазідом (ТУ У 46.15.396-99) дослідні групи тварин і птиці при ГРЗ обробляли у вигляді 0,3-0,5%-го розчину із розрахунку 1 л/100 м3 приміщення тричі, протягом 3-5 діб, з інтервалом 5 днів. Експозиція 60 хвилин.
Хвойна хлорофіло-каротинова паста (ТУ У 46.15.397-99) є відомим профілактичним засобом, до складу якої входять вітаміни А, С, Є, ферменти, антибіотики, мікроелементи, стерини та інші
біологічно-активні речовини. Згідно з Настановою, затвердженою ДДВМ 06.09.1999 р., аерозольну обробку тварин і птиці проводили 0,3-0,5%-вим розчином із розрахунку на 1 л/100 м3 приміщення протягом 5 днів при експозиції 60 хвилин.
Флавосмолон - містить флавоноїдні глікозиди та екстракти біологічно-активних речовин з рослин, мікроелементи і 30%-ний розчин етанолу. При аерозольному застосуванні у вигляді 0,3-0,5%-го розчину лікувально-профілактична активність зумовлена комплексом біологічно-активних речовин, що проявляють протизапальні, протимікробні, протипухлинні, анестезуючі властивості та седативну дію.
В окремих господарствах до і після проведення аерозольної обробки тварин, в приміщеннях відбирали проби повітря шляхом висіву на чашки Петрі з поживними середовищами МПА, Ендо, Чапека та ін.
Вплив аерозолів зазначених препаратів на стан природної резистентності та імунобіологічної реактивності організму дослідних тварин визначали за показниками: фагоцитарної активності нейтрофілів крові, фагоцитарного індексу (Плященко СП., Сидоров В.Т., 1979), бактерицидної активності сироватки крові (БАСК) -нефелометричним методом, кількість еритроцитів і лейкоцитів в крові методом підрахунку в камері Горяєва (Чумаченко В.Ю. з співав., 1990), вміст гемоглобіну по Салі, загальний білок сироватки крові - рефрактометричним методом за Рейсом.
Обчислення цифрового матеріалу здійснювали методами статистичної обробки даних за допомогою програм електронних таблиць Excel.
Запропоновані виробництву системи аерозольних розпилювачів типу САГ-1, САГ-2 та САГ-10 на сьогодні не забезпечують створення у тваринницьких приміщеннях дрібнодисперсного аерозолю, з розміром частинок до 10 мкм, які здатні були б проникати в альвеоли. Саме тому, для підвищення ефективності профілактичних і лікувальних аерозольних обробок тварин, нами разом з інженером конструктором ВАТ «НДІ фермаш» Литвином П.В. було сконструйовано новий тип аерозольного розпилювача АР-10 (патент на винахід №2003065162, 2003 р.) та новий аерозольний агрегат причіпний ААП-10 (рис.1).
Вперше АР-10 і ААП-10 комісійно були апробовані у Славутському державному підприємстві ветеринарної медицини Хмельницької області. Основне їх призначення - аерозольна групова вакцинація, профілактика й лікування тварин і птиці при ГРЗ активними біологічними препаратами, санація і дезінфекція тваринницьких приміщень. Переваги АР-10 - створення дрібнодисперсного аерозолю (95% аерозольних частинок розміром 1-10 мкм), простота і надійність конструкції, зручність в експлуатації, можливість підключення до компресорів різної потужності та значний (10 л) об'єм циліндра для розчинів.
Основні складові агрегату: 1-автопричіп з ААП-10; 2-компресор з електроприводом; 3-аерозольні розпилювачі; 4-барабан із рукавом для стиснутого повітря.
Технічна характеристика:
Установлена потужність, кВт 7,5 Маса агрегату, кг 500 Тип аерозольних розпилювачів переносний АР-10 Продуктивність одного розпилювача, мл/хв. 250-500 Дисперсність аерозолю, мкм (95% осн. часток розміром від 1 до 5 мкм) 1-10 Робочий тиск стиснутого повітря, для роботи розпилювача, кг/см2 3-5 Кількість обслуговуючого персоналу, люд. 1
За результатами аерозольної обробки молодняку великої рогатої худоби в неблагополучних по парагрипу-3 та інфекційному ринотрахеїту господарствах Славутського району Хмельницької області у 2,4 рази зменшилась захворюваність тварин, у 4,5 рази знизився відсоток вимушених забоїв і санітарного браку та у 7 - 10 разів підвищилась продуктивність праці ветеринарних фахівців.
Проведенню науково-виробничих дослідів по застосуванню аерозольного методу групової обробки тварин і птиці протефлазідом, ХХКП та флавосмолоном передувало епізоотичне обстеження господарств, неблагополучних по ГРЗ. Перші обстеження проведені птахофабрик «Україна» та держплемзаводу «Рудня» Київської області на предмет визначення їх благополуччя по хворобі Марека і лейкозах. Було виявлено, що серед курчат віком 36-90 днів кросу «Білоруський» мали місце прояви анемії, атрофія грудних м'язів. Основними ознаками хвороби Марека було потовщення сідничного нерву, збільшення і дряблість печінки й селезінки. Ознаками лейкозу - наявність пухлин на шкірі і в печінці, набряк легень, дуоденіт. В окремих випадках лабораторно підтверджено ешерихіоз.
Більш чіткі ознаки нашкірного лейкозу і саркоми було відмічено у дорослої птиці породи Іза-браун у період інтенсивної яйцекладки.
На моделі птиці в умовах клініки-ізолятора кафедри визначили оптимальну профілактичну дозу протефлазіду - 50 мг/кг та лікувальну - 100мг/кг. При визначенні дози враховували, що одна крапля екстракту протефлазіду важить близько 34 мг і містить 6,25 мкг флавоноїдних глікозидів.
На базі господарств КСП «Хотівське», «Музичанське» і «Білогородка» Києво-Святошинського району, Київської області від РІД позитивних на лейкоз корів було сформовано 7 дослідних груп телят, по 10 голів у кожній, для визначення фізіологічного статусу тварин при оральному і внутрішньовенному введенні препарату. Дослідним телятам 20-30-денного віку на протязі 20 діб з молоком випоювали профілактичні та лікувальні дози препарату. Протягом 12 місяців за тваринами проводили клінічний нагляд, визначали вагу та один раз в квартал відбирали кров для дослідження на лейкоз по РІД.
Проведеними дослідженнями з'ясовано, що 9 реагуючих на лейкоз телят з 6-місячного віку залишились РІД від'ємними. Телята добре росли і розвивались, а в 12 місяців їх середня вага на 20 кг була більшою контрольної групи. Жодне теля дослідної групи не хворіло з ознаками пневмонії.
На окремій групі телят (20 гол.) ми відпрацювали методику внутрішньовенного застосування протефлазіду. При цьому врахували, що технологія виготовлення препарату передбачає спиртове його екстрагування із трав і певний вміст етилового спирту. Тому, перед внутрішньовенним введенням (extempore) в шприц об'ємом на 20 мл вносили лікувальну чи профілактичну дозу препарату і розводили її реополігюкіном 1:10.
Клінічні спостереження засвідчили кращий фізіологічний стан у дослідних тварин. Вони були більш рухливими й активними, і серед них не спостерігали ознак бронхопневмонії та проявів проносу.
Результати проведених нами досліджень представлено у таблиці 1.
Ці дані свідчать, що найвища лікувально-профілактична ефективність при ГРЗ реєструвалась при застосуванні протефлазіду як противірусного препарату. Процент збереження телят в межах 97,8-98,3%, поросят – 99,7%. Дещо менша збереженість телят при груповій аерозольній обробці ХХКП – 95,0-98,0%.
Висока профілактична ефективність групової обробки курчат аерозолями протефлазіду (99,7%) та ХХКП (98,2%).
Таблиця 1 – Результати науково-виробничих дослідів по аерозольній профілактиці і лікуванні ГРЗ тварин і птиці протефлазідом, хвойною хлорофіло-каротиновою пастою та флавосмолоном.
Паралельно з проведенням аерозольних обробок визначали мікрофлору повітря свинарників (табл. 2). Результати проведених досліджень свідчать про те, що до аерозольної обробки приміщення ХХКП серед виділених на поживних середовищах колоній мікроорганізмів 27 належало до ентерококів, 25 – стафілококів, 21 – Asp. flavus, 11 – ешерихій та ін. Всього виділено 108 колоній. Через 2 години після аерозольної обробки кількість мікроорганізмів повітря зменшилась до 4 колоній, тобто у 20 разів. Через 4-6 годин кількість мікроорганізмів в приміщенні поступово зростає за рахунок аспергіл та спорових.
Таблиця 2 - Характер виділеної мікрофлори повітря приміщень до і після обробки аерозолями ХХКП і флавосмолону
Аналогічна картина спостерігалась і після обробки свинарника аерозолем флавосмолону. Наявність в господарстві аспергіло-токсикозу потребує проведення ретельної дезінфекції по знищенню спор аспергіл.
Показники природної резистентності поросят дослідних груп до і після застосування аерозолю 0,5%-го розчину ХХКП та 0,5%-го флавосмолону представлено в таблиці 3.
Таблиця 3 - Деякі показники крові поросят до та після аерозольних обробок (М±m, n=10).
Після першої трьохкратної аерозольної обробки поросят дослідних груп аерозолями ХХКП і флавосмолону помітно зростання цих показників у порівнянні із контрольною групою.
Показники природної резистентності у поросят дослідних груп продовжували зростати і після чергових аерозольних обробок активними біологічними препаратами через 14 днів і 20 днів. Дещо більш стабільне зростання гемоглобіну та фагоцитарної активності нейтрофілів крові відмічено під впливом 0,5%-го розчину ХХКП.
Повторний науково-виробничий дослід по застосуванню аерозолю 0,5%-их розчинів ХХКП та флавосмолону на свинях 2-4 місячного віку ще раз підтвердив позитивний їх вплив на показники природної резистентності організму тварин та зменшення умовно патогенної і патогенної мікрофлори в повітрі свинарників.
Висновки
Терапевтическая эффективность аэрозольной обработки молодняка составила 98,3-99,7%.
Realized investigations permit to affirm that proteflazyd is a new home-produced antiviral preparation, which contains flavonoid glycoside.
Preparation is able to oppress the enzymes of thymidinkinase and DNA-polymerase in infected cells and thus it prevents the reproduction of virus. Besides, it promotes to synthesis of endogenous alpha- and gamma-interferons, that raise natural resistance and immune status of organism.
Therapeutic efficacy of aerosol treatment of animals and poultry made 98,3 - 99,7 %.