СТАТТЯ


Литвин В.П., Поліщук В.В., Кучеренко І.А. Нові пробіотики, їх захисна роль в організмі і обґрунтування до застосування //Вісник аграрної науки. -1998. - Спеціальний випуск, вересень. - С. 51-56.

УДК 619:616.98.99:636.22/28

В. П. Литвин,
доктор ветеринарних наук

В. В. Поліщук,
кандидат ветеринарних наук

І.A. Кучеренко

Національний аграрний університет


НОВІ ПРОБІОТИКИ, ЇХ ЗАХИСНА РОЛЬ В ОРГАНІЗМІ І ОБГРУНТУВАННЯ ДО ЗАСТОСУВАННЯ

Запропоновані для виробництва нові пробіотики (споролакт, моноспорин-ПК, біфідумбактерин ветеринарний) порівняно до відомих препаратів є активнішими відносно умовно-патогенної і патогенної мікрофлори травного каналу. Лікувально-профілактична ефективність запропонованих нових пробіотиків у разі гострих шлунково-кишкових захворювань тварин раннього віку сягає 98—100%.

За визначенням академіків В.П. Урбана (1978), B.I Левченка (1997) шлунково-кишкові хвороби новонароджених характеризуються порушенням секреторної, моторної, всмоктувальної, екскреторної функцій травного каналу, розладом обміну речовин, зневодненням, дисбактеріозом та інтоксикацією організму. Це комплексні захворювання, які пов'язані перш за все з неповноцінною годівлею маточного поголів'я, порушенням обміну речовин у вагітних маток та в організмі новонароджених. Найчастіше хворіють телята і поросята наприкінці зими — на початку весни (до 100%).

Наші спостереження і дослідження свідчать, що аліментарна, аутоімунна і токсична диспепсії переростають у дисбактеріоз, який призводить до зміни співвідношення між окремими групами мікроорганізмів: замість корисних молочнокислих, грампозитивних бактерій (лактобактерії, ацидофільні, біфідобактерії, ентерококи, ешеріхії та ін.) збільшується кількість гнильних, грамнегативних ешеріхій, вульгарного протею, анаеробів, синьогнійної палички, дріжджоподібних та інших представників патогенної мікрофлори. У разі дисбактеріозу насамперед зменшується кількість лактобактерій, біфідобактерій і анаеробних спороутворюючих бактерій, для яких характерна висока антагоністична активність щодо патогенної і гнильної мікрофлори, здатність створювати у кишечнику кисле середовище, нагромаджувати ферменти, синтезувати амінокислоти, вітаміни та інші корисні для макроорганізму біологічно активні речовини. Місце локалізації корисної мікрофлори в тонкому і товстому кишечнику заселяють грамнегативні та гнильні мікроорганізми, які вступають у нові незвичайні асоціації, особливо з рота-, корона- і парвовірусами та найпростішими — кріптоспорідіями.

Таким чином, на основі токсичної форми диспепсії та інших незаразних хвороб можуть виникати специфічні інфекційні хвороби: еше-ріхіоз (колібактеріоз), сальмонельоз, анаеробна ентеротоксемія, стрептококоз, кандідамі-коз, рота-, корона- і парвовірусні інфекції з ознаками діареї. Зазначені інфекційні хвороби характеризуються певною стаціонарністю, перебігають у формі ензоотії, коли збудник, як правило, не занесено з інших господарств. Пасажуючись через організм сприйнятливих тварин, патогенні мікроорганізми посилюють свою вірулентність і, виділяючись з секретами та екскретами в довкілля, викликають захворювання у цілком здорового молодняку [1—6}.

Матеріал і методи. Досліди проведено на сільськогосподарських і домашніх тваринах раннього віку та птиці. При цьому використано загальноприйняті в мікробіології і епізоотології методи дослідження та поживні середовища (МПА, МПБ, Ендо, Плоскірєва, МРС, тіогліколеве, Сабуро, Громико, жовтково-сольовий агар та ін.). Обчислення здійснювали за традиційними методами.

Кількість мікроорганізмів у 1 мл вихідного матеріалу (С) розраховували за формулою: C=N/VK, де N — середня кількість колоній в 1 бактеріологічній чашці; V — об'єм суспензії, який наносять під час висівання на поверхню агару; К — кратність розведення. Отримані дані оброблено статистично.

Результати досліджень. Традиційні методи лікування хворих тварин із застосуванням антибіотиків, сульфаніламідних та нітрофуранових препаратів призводять до зменшення в кишечнику не лише патогенних ентеробактерій, а й представників нормофло-ри, особливо молочнокислих і біфідобактерій [6, 8, 9]. Враховуючи зазначене і виходячи з етіопатогенетичної спрямованості терапії у разі інфекційних захворювань, нами разом з науковими співробітниками Інституту вірусології і мікробіології НАН України (С.Р. Рєзнік, І.Б. Сорокулова, В.О. В'юницька, В.В. Смірнов, 1992) розроблено і впроваджено у виробництво новий профілактичний і лікувальний препарат споролакт (ТУ У 46.15.057—94), до складу якого ввійшли в рівних об'ємах нормальні аеробні спороутворюючі бактерії Вас. subtilis, Вас. licheniformis і лактобактерії — Lactobacillus fermentum (Роспатент № 2035186).

Для пробіотиків, створених на основі аеробних спороутворюючих бацил, після їх перорального застосування характерним є проростання спор (перехід у вегетативну форму). Цей процес супроводжується інтенсивним продукуванням антибіотичних речовин (пробіотиків), протеолітичних ферментів, лізоциму тощо.

Бактеріологічним дослідженням кишкового вмісту встановлено, що кількість життєздатних бацил після введення препарату в дозі 1—10 млрд мікробних клітин в 1 г вмісту становить 106—107 КУО.

Споролакт є високоефективним засобом профілактики і лікування гострих кишкових інфекцій та дисбактеріозів різної етіології. Найбільш виражений клінічний ефект препарат виявляє в ранні строки лікування (3—7 днів). Характерно, що за протимікробною активністю до музейних і польових штамів тест-культур споролакт перевершує бактерин-SL, біоспорин і лактобактерин (табл. 1).


1. Порівняльна характеристика протимікробної активності пробіотиків до музейних і попьових штамів тест-культур
Тест-мікроорганізми
Зони пригнічення росту тест-культур, мм
біоспорином
бактерином-SL
споролактом
лактобактерином
Музейні штами
Salmonella thyphimurium
15
19
22
5
S. newport 5751
12
18
20
2
S. derby 1519
12
20
22
0
S. equiabortus
10
14
16
0
S. greis 1190
12
20
23
4
S. reading 5720
12
28
32
15
S. stenley 5266
17
22
26
6
Shigella sounei
16
20
22
4
Pr. vulgaris 72
18
30
35
Pr. vulgaris 181
16
21
27
Kl. pneumoniae 5055
10
10
10
E. coli 111
12
18
29
12
E. coli 064
11
17
23
11
Staph. aureus 209
17
22
25
Cand. albicans
25
25
35
Польові штами
Klebsiella sp. (T-2)
17
16
21
Cand. albicans (Л.)
14
12
22
Staph. aureus (B.H.)
13
15
28
E. coli (Л.)
9
15
22
Примітка. «—» облік не проводили.
Такий же позитивний вплив мав пробіотик на умовно патогенну мікрофлору кишечника тварин з експериментальним дисбактеріозом (табл. 2; рис. 1) під час терапії хворих телят.

2. Коригуючий вплив споролакту, бактерину-SL та лактобактерину на мікрофлору кишечнику з експериментальним дисбактеріозом
Мікроорганізми
Кількість мікроорганізмів (КУО/г)
до лікування споролактом
через 5 діб після 10-денного курсу лікування споролактом
до лікування бактерином-SL
через 5 діб після 10-денного курсу лікування бактерином-SL
до лікування лакто-бактерином
через 5 діб після 10-денного курсу лікування лакто-бактерином
Біфідобактерії
відсутні
108
відсутні
107
відсутні
108
Лактобактерії
відсутні
(2,7-5,4)x107
відсутні
(3,1-4,1)x106
відсутні
(5,4-7,2)x107
Ентерококи
(3,1-3,7)x107
(2,4-7,7)x106
(2,6-5,2)x107
(4,4-5,4)x106
(5,2-8,1)x107
(3,1-3,8)x107
Лактозопозитивні БГКП
(4,2-5,3) x106
(3,2-6,6)x106
(2,1-6,2)x106
(3,7-4,2)x106
(2,4-5,3)x107
(2,8-5,2)x107
Лактозонегативні БГКП
(3,1-6,4)x106
(2,8-5,4)x104
(2,4-3,8)x106
(2,2-4,4)x104
(3,4-4,2)x106
(2,2-4,9)x105
Бактерії роду Proteus
104
103
104
103
104
104
Стафілококи
(2,6-5,1)x106
(3,4-4,1)x104
(2,8-5,2)x106
(3,6-4,1)x105
(3,4-7,1)x106
(2,2-2,6)x105
Аеробні спороутворюючі бактерії
відсутні
(2,2-3,6)x107
відсутні
(3,6-7,2)x107
відсутні
(1,4-3,3)x104
Дріжджоподібні гриби
(3,4-7,1)x105
(1,4-2,8)x104
(2,6-5,1)x105
(3,8-6,9)x104
(2,6-5,4)x105
(4,1-4,8)x105
Рисунок 1
Введення споролакту

Мікрофлора кишечника телят, яких лікували комплексним пробіотиком споролактом:
а - біфідобактерії; б - ентерококи; в - лактозонегативні БГКП; г - стафілококи;
д - дріжджоподібні гриби; е - лактобактерії; ж - лактозопозитивні БГКП; з - протеї; і - бацили.


Досліди, проведені на телятах у неблагополучних господарствах (табл. 3), підтвердили, що профілактичне застосування споролакту новонародженим тваринам за 15—20 хв. до випоювання їм першої порції молозива і в наступні 2—3 дні запобігає захворюванню на діарею в 100% випадків. Випоювання пробіотика хворим телятам у дозі 200—300 млрд. мікробних клітин протягом 3—4 днів забезпечує їх клінічне видужання у 97,8% випадків.

3. Результати застосування споролакту при дисбактеріозах та ешеріхіозі телят
Господарство
Всього тварин
Із них
одужало
загинуло
одужало, %
Лікування
Радгосп «Вороньківський», Київська обл.
37
36
1
97,3
Головний селекційний центр України, Київська обл.
4
4
100
КСП «Перемога», Хмельницька обл.
38
37
1
97,4
ДПЗ «Плосківський», Київська обл.
12
12
100
Всього
91
89
2
97,8
Профілактика
Радгосп «Вороньківський», Київська обл.
43
43
100
Головний селекційний центр України, Київська обл.
5
5
100
ДПЗ «Плосківський», Київської обл.
17
17
100
Всього
65
65
100
Завдяки 5-річному науковому пошуку разом з доцентом Ужгородського державного університету Н.В. Бойко створено новий пробіотик з ширшим спектром протимікробної дії — моноспорин-ПК (ТУ У 46.15.275—97). Основою препарату є культура Вас. subtilis ВКПМ № В-5225, що має специфічну протиклебсієльозну активність, виявляє бактеріостатичну, бактерицидну, антитоксичну і фунгіцидну дію на ряд патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів та їх токсинів, стимулює фагоцитарну активність моноцитів і нейтрофілів, індукує продукцію ендогенного інтерферону.

Державним Департаментом ветеринарної медицини Міністерства АПК України затверджено Тимчасову настанову з його застосування у виробництві для профілактики і терапії гострих шлунково-кишкових захворювань молодняку сільськогосподарських тварин і птиці. Нами визначено профілактичні дози моноспорину-ПК: телятам і лошатам перший раз випоюють 1—2 дози (10—20 млрд. мікр. кл.); поросятам, ягнятам, хутровим звірам — 0,5—1 дозу (5—10); птиці — 0,1—0,3 дози (1,0—3,3 млрд. мікр. кл.). Повторно препарат випоюють через 24 і 48 год.

Під час лікування хворих тварин пробіотик задають двічі на добу з інтервалом 10— 12 год, протягом 7—12 днів із розрахунку: телятам і лошатам — 6 доз (60 млрд. мікр. кл.); поросятам, ягнятам, хутровим звірам — 3 дози (30 млрд. мікр. кл.); птиці — за схемою:
Вік (діб):Дози:
1-300,01-0,05 (0,1-0,5 млрд. мікр. кл.)
31-600,05-0,1 (0,5-1,0 млрд. мікр. кл.)
61 і більше0,1-0,2 (1-2 млрд. мікр. кл.)
У співдружності з доцентом О.В. Григор'євим нами апробовано пробіотик — біфідум-бактерин ветеринарний, до складу якого ввійшли високоактивні біфідобактерії-антагоністи із штамів 1 або 791 та наповнювачі — каолін, лактоза і активоване вугілля. Одна доза означеного препарату містить 107 мікробних клітин біфідобактерій.

Застосовують пробіотик для профілактики і лікування дисбактеріозу різної етіології, у разі гострих кишкових інфекцій та запальних процесів генітальних органів у сільськогосподарських тварин різних видів.

При пероральному застосуванні препарату біфідобактерії протягом 3—5 днів забезпечують швидкий ефект колонізації слизової оболонки кишечника тварин чи птиці, сприяють розмноженню корисних лактобактерій, ешеріхій, стрептококів, що швидко відновлює природний мікробіоценоз у травному каналі (табл. 4).


4. Визначення окремих представників родини Enterobacteriaceae від курчат після 10-денної профілактичної обробки біфідумбактерином, левоміцетином, фуразолідоном (середовище Endo і вісмут-сульфат)
Група,
препарат
Досліджуваний матеріал
Патогенна мікрофлора
Нормальна мікрофлора
виділилось, %
висіялось мікроорганізмів
Висіялось мікроорганізмів
Загальна кількість Е. coli в 1 мг (1 мм2)
І Контроль
Фецес
X
Proteus
Е. coli
3,2-104
25
Е. coli (Л.)
Слизова сліпої кишки
25
Е. coli (Л.)
»
3,1-103
II Левоміцетин
Фецес
35
Е. coli (Л.)
»
2,7-103
Слизова сліпої кишки
35
Е. coli (Л.)
»
1,8-103
S. enteritidis
III Фуразолідон
Фецес
15
Klebsiella
»
6,6-103
45
Е. coli (Л.)
Слизова сліпої кишки
45
Е. coli (Л.)
»
1,3-103
IV Біфідумбактерин
Фецес
»
3,1-104
Слизова сліпої кишки
»
1,6-103
Нами відпрацьовано профілактичні і лікувальні дози біфідумбактерину ветеринарного (табл. 5).

5. Профілактичні та лікувальні дози біфідумбактерину ветеринарного для тварин і птиці
Тварини
Вік,
діб
Профілактичні дози
Тривалість застосування, діб
Лікувальні дози
Тривалість застосування, діб
Ефективність, %
Телята
1—10
15
3—5
15
7—12
98
11—30
30
3—5
30
7—14
100
Поросята
1—10
5
3—5
5
7—12
95
11—35
10
3—5
7—12
96
Ягнята
1—10
10
3—5
10
7—12
96

Птиця (курчата)
1—10
0,01—0,02
5—8
0,02
10—14
94
11—30
0,03—0,05
5—8
0,05
10—14
96
31—60
0,06—0,1
5—8
0,1
10—14
98
61 і більше
0,2—0,5
5—8
0,5
10—14
98
Собаки
30—60
10
3—5
15
7—12
100
61 і більше
10
3—5
15
7—12
100
Науково-виробничі досліди на телятах, поросятах і птиці засвідчили, що високий рівень біфідобактерій у складі нормофлори запобігає розвитку дисбактеріозу, сприяє нормальному мікробіоценозу кишечника, нормалізує функцію травлення, підвищує неспецифічну резистентність організму тварин і птиці та поліпшує ріст і розвиток усього організму (табл. 6).

6. Вплив пробіотиків на показники росту і розвитку курчат (М±т, n=10)
Вік курчат, міс
Контрольна група
Застосовано
моноспорин
біфідумбактерин
споролакт
зооспорин
Добові
n=20
515,0*
25,75 ±0,411**
518,0
25,90±0,641
510,0
25,80 ± 0,308
485,0
24,25 ± 0,411
509,0
25,45 ± 0,641
1 міс
1090
109,0 ± 8,980
1520,0
152,0 ±3,246
1430,0
143,0 ± 3,084
1310,0
131,0 ±4,113
1170,0
117,0 ±4,113
2 міс
3070,0
307,0 ± 18,509
4190,0
419,0 ± 6,493
3840,0
384,0 ±4,113
3670,0
367,0 ± 9,254
3480,0
348,0 ±7,198
3 міс
6480,0
648,0 ±20,103
8900,0
890,0 ± 15,152
8520,0
852,0 ±11,311
8080,0
808,0 ± 15,424
7800,0
780,0 ± 16,452
4 міс
8190,0
819,0 ± 18,509
10780,0
1078,0 ±22,728
9610,0
961,0 ± 10,283
8930,0
893,0 ± 12,339
8220,0
822,0 ± 10,283
5 міс
9750,0
975,0 ± 19,537
12925,0
12925,0 ± 21,646
12890,0
1289,0 ±23,650
11440,0
1144,0 ±33,933
10060,0
1006,0 ±39,773
6 міс
11490
1149,0 ± 30,849
15020,0
1502,0 ±6,493
14800,0
1480,0 ±20,556
12910,0
1291,0 ± 21,594
11920,0
1192,0 ± 21,594
* Верхній рядок — загальна маса курчат, г;
** Нижній рядок — середня маса одного курчати, г.

Для профілактики і лікування кишкових інфекцій пробіотик застосовують перорально у суміші з кормом або водою за 20—30 хв. до годівлі. Новонародженим телятам по 15 доз біфідумбактерину в 100 мл води (з 10-денного віку — по 30 доз у 200 мл води) випоюють двічі на добу, з профілактичною метою — протягом 3—5 днів, з лікувальною — до зникнення ознак діареї (7—12 днів). Тваринам інших видів і птиці пробіотик рекомендовано в дозах, наведених у табл. 5.

Під час гострих інфекційних захворювань тварин лікують комплексно з використанням пробіотиків, не застосовуючи перорального введення антибактеріальних препаратів.


Висновки
  1. Нові пробіотики — споролакт, моноспорин-ПК, біфідумбактерин ветеринарний порівняно з відомими пробіотиками бактерином-SL, лактобактерином та біоспорином є більш активними відносно умовно-патогенних і патогенних тест-мікроорганізмів. Серед них найбільш чутливими до споролакту були ешеріхії, протей, окремі види сальмонел та гриби роду Candida.
    Лікувально-профілактична ефективність споролакту у разі гострих шлунково-кишкових захворювань телят досягає 98%.
  2. Запропоновані при гострих кишкових інфекціях новонароджених нові пробіотики споролакт, моноспорин-ПК, біфідумбактерин ветеринарний протягом 3—5 днів забезпечують швидку колонізацію слизової кишечника травного каналу корисними лактобактеріями, ешеріхіями, стрептококами та іншими мікроорганізмами, що дає змогу відновити природний мікробіоценоз.
  3. Пробіотики споролакт, моноспорин-ПК, біфідумбактерин ветеринарний схвалено державним Департаментом ветеринарної медицини Міністерства АПК України та Департаментом ветеринарії Мінсільгосппроду Росії і рекомендовано для впровадження у ветеринарну практику.
Бібліографія
  1. Андреев Е.В. Ассоциированное воздействие на организм вируса и условно-патогенных бактерий // Ветеринария. — 1984. — № 7. — С. 25—27.
  2. Болезни молодняка сельскохозяйственных животных: Справочник/ В.П.Литвин, В.И.Береза, В.Г.Скибицкий и др. — К.: Урожай, 1992. — 168 с.
  3. Головко A.M. Засоби діагностики та специфічної профілактики колібактеріозу телят на основі факторів патогенності збудника /Автореф. дис. ... докт. вет. наук. — Харків, 1996. — 33 с.
  4. Зароза В.Г. Колибактериоз новорожденных телят: Обзор информ. — М., 1995. — 56 с
  5. Карпуть И.М. Иммунология и иммунопатология болезней молодняка. — Минск: Ураджай, 1993.— 288 с.
  6. Литвин В.П. Життєдайна дія пробіотиків // Ветеринарна медицина України. — 1996. — №2.—С 12—14.
  7. Урбан В.П. Классификация болезней новорожденных телят // Ветеринария. — 1978. — № 1. — С. 55—57.
  8. Шлунково-кишкові хвороби новонароджених телят / B.I. Левченко, В.П. Заярнюк, I.B. Папченко, В.М. Івченко // Ветеринарна медицина України. — 1997. — № 4. — С. 30—33.
  9. Stiven M.F. Probiotica intestinal inoculants for production animals // Veterinary med. — 8 — 1991. — P. 806—824.


0.jpg51.jpg52.jpg53.jpg54.jpg55.jpg56.jpg114.jpg